(2)诱导不定芽形成和生长的激素除现有的芽之外, 任何器官上的, 通过器官发生重新形成的芽称为不定芽 。 促进外植体形成不定芽, 要使用一定量的细胞分裂素和生长素, 一般浓度不能过高 。 否则不但使器官分化能力降低, 而且也使遗传性难以稳定 。 诱导外植体形成不定芽时, 一般使用细胞分裂素的浓度高于生长素浓度的配比, 但也经常采用细胞分裂素和生长素浓度的比值接近于1的配比 。 有的材料还需加入低浓度的2,4-d才能诱导不定芽的产生 。 具体应用时应查阅资料, 并通过大量筛选来寻找最适当的细胞分裂素和生长素种类和浓度的配比 。 但总的原则还是如上所述, 不能片面追求增殖率, 既要求一定的增殖率, 也要保证小苗的质量 。
(3)促进胚状体的形成和繁殖的激素胚状体途径的优点是增殖率高, 而且同时具有胚根和胚芽, 可免去生根 。 现在胚状体发生还不普遍或产生的胚状体难以成株或成株率太低, 以及遗传性尚不稳定, 故仅在有限植物中应用 。 一般是在含有丰富还原氮的培养基上, 加有生长素, 特别是2,4-d以诱导胚状的发生, 然后转移到降低浓度或没有生长素的培养基上使其成熟、萌发和生长 。 培养基中, 还可加入其他附加成分, 如氨基酸, 水解乳蛋白(lh)300mg/l~500mg/l, 水解酪蛋白(ch)200mg/l~500mg/l, 以及腺嘌呤(ade)1mg/l~80mg/l等, 以促进组培苗的生长 。
2、改善培养条件
组培苗增殖与培养条件如温度、光照、湿度、培养器皿和培养基的ph值密切相关, 需要进行控制, 以促进繁殖 。
(1)温度(temperature)
不同植物增殖的最适温度不同, 大多采用25±2℃的温度 。 一般低于15℃时, 培养的组织生长出现停滞, 而高于35℃对生长也不利 。 促进芽的形成温度略低, 如烟草芽形成以18℃最好, 12℃以下, 33℃以上成芽率均低 。 增殖苗的温度一般是恒温, 也有昼夜变温下生长效果比恒温好的, 如百合 。 在考虑某种培养物的温度要求时, 也应考虑原植物的生态环境所处温度条件, 如松树一般生长在较高的海拔及较低的温度环境, 在较高温度的培养条件下其组培苗生长变慢, 有人采用两到三个月的模拟冬天的低温环境, 又使生长恢复 。 温度预处理也对组培苗增殖有影响 。 高温处理不仅可获得无病毒植株, 也影响到器官发生 。 草莓的茎尖分生组织经38℃处理3d~5d, 提高了无病毒茎尖分生组织的成活率 。 天竺葵一个品种分别用10℃、20℃和30℃等不同温度处理1周~4周, 培养8周后, 以10℃处理的茎尖繁殖数最高, 20℃处理的其次, 30℃处理的最差, 在木本植物的胚培养中, 发现胚在2-5℃条件下进行一定时间的低温处理, 有利于提高胚的成活率, 如桃 。
(2)光照(light)光对组培苗生长增殖也有明显影响, 表现在光照、光质和光周期等方面 。 光照强度对细胞、组织的增殖和器官的分化研究尚少, 因此看法不一致 。 在一些植物(如荷兰芹等)的组织培养中, 发现器官形成不需要光;而另一些植物(如菊芋、卡里佐枳橙)的组织培养中, 则发现光对器官的形成有重要作用 。 据报道用黑暗、2200lux和5700lux等不同光照处理卡里佐枳橙的茎尖培养, 茎尖分化新梢数随着光强增加而增加, 分别增加153.8%和238.5% 。 吴绛云发现对光照显著促进黑穗醋栗幼苗的增殖 。 而王际轩等培养苹果砧木的芽, 通过暗培养产生黄化苗, 明显提高茎尖增殖率 。 关于光周期, 组培苗的增殖与分化, 许多研究者都选用一定光周期来培养, 最常用的光周期是16h光照, 8h黑暗 。 有人发现菊芋块茎器官的分化, 每天1h600lux光照有促进, 到12h由达最高限度, 再增加则无作用 。 曹孜义等用连续光照培养葡萄组培苗, 绝大多数品种可加快苗的增殖, 而且使苗生长健壮 。 王永明发现一月以上每日10h以下光照, 会使部分苗生长停止和封顶, 若延长至12h~16h, 则可消除 。 如果诱导试管内花的形成, 那日照长短则是一个重要因素 。
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