【多】兰花多倍体新物种培育初探( 二 )


但是兰花与西瓜不同 。 西瓜幼苗的芽是裸芽 , 没有包被包裹着 , 而且不沾任何杂质 , 容易处理 。 而兰花的芽是在假鳞茎基部 , 除了原株的叶片或叶鞘所包围外 , 芽的本身由多层甲壳包裹着 , 是被芽秋水仙素不易接触 , 生长发育也没有西瓜迅速 。 根据这一点 , 我设计了以下几种方法 。
一、用20PPn浓度的秋水仙素水溶液:1.用皮试用的注射器和针头注入具有萌动芽的假鳞茎一侧上方;2.选择健壮的兰花幼苗(连着一株母株)有两片幼叶开嘴时 , 用消毒刀片在芽原上方割一切口 , 以不割伤生长点 , 浸入20-40ppm浓度的秋水仙素溶液中 , 淹没切口经5-10天 。 这两种方法成功率较好 , 但易感染病菌 , 应注意消毒 。
二、在出苗长芽的繁殖季节 , 挖取健壮苗假鳞茎四周的植料 , 露出幼芽 , 但不能损伤幼芽 , 放上脱脂棉球 。 用20ppn浓度 , 每天两次 , 两天为一疗程 , 滴浸保湿隔两天 , 再搞一个疗程 。 视芽大小 , 可做4-2个疗程 。
三、将兰株脱盆除去植料 , 选择健壮、芽多的植株 , 洗净沥干 , 用脱脂棉包裹兰株 , 外加数层洁净餐巾纸包围 。 用20ppn溶液滴浸脱脂棉上 , 一天两次 , 植入盆中后 , 隔两天还可进行 。 这样可以防止秋水仙素与植料中的物质起化学反应 , 因为秋水仙素溶液的浓度本身很低(此法有可能影响细胞有丝分裂进行最佳期)
四、将30ppn浓度秋水仙素水溶液 , 从有萌发芽的叶腋里直接滴入或开嘴幼苗的嘴里 , 一天两次 , 两天一疗程 , 隔两天再行处理 。
当然 , 其他方法还有 , 如用无土栽培 , 对秋水仙素起化学反应的干扰因素就少些 , 效果就会高些 。 当试验苗有启色 , 就应将母子株分离下来一同进行定向培育 。
秋水仙素浓度的配制:没有分析天秤 , 1瓶只有1克怎么办 , 我是用等分法 。 将1克秋水仙素淡黄色粉末 , 全倒在一张洁净的白纸上 , 纸的四周用米尺或镇纸石(木)压实 , 并关好门窗 , 防止被风吹走 。 用洁净小刀将一克秋水仙素淡黄色粉末分成十个等分 , 用一等分再分十个小等分 , 即得每一小等分为0.01克 。 取一小等分 , 先用少许75%乙醇溶解 , 然后加入1000克蒸馏水兑成100ppn秋水仙素母液 , 用时再兑至所需浓度 , 兑蒸馏水时可用量筒 , 或用注射器抽量 。 蒸馏水的重量与体积之比为1克相当于1毫升(其余不用的秋水仙素粉末还有九个等分 , 装回原瓶中 , 用蜡封好 , 以免失效 。 其余九个小等分 , 可用金铂包成九个小包 , 外加大包放在小尼龙食品袋中封好待用) 。 秋水仙素溶液应随配随用 , 久置会变成淡棕色或沉淀、失效 。
经过2000年、2001年两年的4-5月份 , 在300多盆下山草(2002年为熟草)上用不同方法 , 不同浓度 , 不同次数的试验 , 虽然没有达到预定的目的 , 没有将宋梅、大富贵育成大宋梅、特大富贵 , 更没有像多倍体菊花那样大的变化 , 但根据多倍体植株比普通两倍体植株表现为茎秆粗壮 , 叶片、果实种子都比较大 , 营养物质含量增多等特点 , 如三倍体甜菜单产比普通甜菜高10%-15% , 异源8倍体小黑麦比一般小麦增产30%-40% , 比黑麦增产20% , 它抗高寒抗瘠、抗病、适应性强;三倍体无籽西瓜不仅无籽……具有抗病、耐贮藏等特点 , 我想多倍体兰花也是这样 。 查看了实验记录 , 有15%左右叶幅明显增宽0.2-0.4cm之间 , 增厚花的主萼片片幅也增宽0.1-0.2cm 。 增厚假鳞茎明显增粗增大 , 更明显的是它的根 , 春兰的根经过试验的比没有试验过的明显增粗、强壮有力 , 近似蕙兰的根 , 芽也粗壮有力…总体看 , 我苑与他们没有搞试验的兰花 , 叶幅普遍要宽些 , 而且(春兰)每苗长有5叶和6片叶较多 。 最多的达7片叶 。 这是目测到的形态变异 。 还要看它细胞结构的变异 , 细胞染色体是否成倍增加 , 防止用矮壮素使用苗假冒 , 因为染色体没有增加 , 不遗传 , 这可能通过生物显微镜(最好电子显微镜)检验 。 你要看到细胞核 , 放大四百倍就够了 。 可以看到玉米那么大的细胞中只有一颗油菜籽大 , 色较深的细胞核 。 要看到细胞中的染色体 , 取材必须是生长旺盛的白嫩根尖约一厘米处的生长点 。 切片要薄 , 越薄越好(有切片器更好),可用7-8片刀片 , 叠好扎紧切 。 二、将切片放入10%左右的乙醇盐酸中10分钟固定解离、蒸馏水中漂洗 , 在载玻片上用甲基蓝染色两分钟 , 用滴管冲洗(蒸馏水) 。 三、盖上盖玻片 , 再盖上吸水纸 , 用食指和拇指用力 , 不能移动 。 镜检时对好光 , 将镜检材料移人视眼正中 , 先低倍后高位 , 油镜可达1500倍 , 可看到有丝分裂各期染色体形状及数目 。

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