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核酸检测流程

小知识

核酸检测常规的样本类型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支气管灌洗液、肺泡灌版洗液等， 权过程如下：
获得患者样本后， 需尽快进行检测， 如无法立即检测需要转运的样本， 应按照说明书的要求进行低温封装， 并送到专门的检测机构进行检测 。 检测机构收到样本后， 对样本进行核酸提取， 核酸提取试剂应使用批准产品说明书中指定的核酸提取试剂盒 。
病毒RNA需要首先逆转录为cDNA， 再进行扩增检测 。 PCR扩增和检测应使用批准产品说明书中指定的荧光定量PCR仪， 通过荧光定量PCR所得到的样本Ct值的大小， 可以判断患者样本中是否含有新型冠状病毒 。

核酸检测流程

文章插图
扩展资料：
目前， 临床上核酸检测主要是通过咽拭子检测方法， 流程是先嘱被检查者用淡盐水漱口， 可以将口腔中的杂菌清理掉， 然后将标签贴于标本容器上 。
告知被检查者取咽拭子培养的目的和方法， 点燃酒精灯， 嘱咐被检查者张口的， 发啊的音， 充分暴露咽喉部， 用培养管内的消毒长棉签以灵敏而轻柔的动作擦拭两侧腭弓和咽扁桃体上的分泌物， 取样完毕后， 将试管口在酒精灯火焰上进行消毒， 然后将棉签插入试管， 塞紧后及时送检 。
核酸检测作为病原诊断的一个重要依据， 是目前确诊的最重要依据， 比如对于目前新冠肺炎的检测， 病毒核酸检测仍是确诊的金标准 。
1、核酸提取使用硅胶柱离心、磁性硅胶颗粒分离方法以及自动化仪器等商品化试剂或设备并按说明书操作 。 提取RNA时应注意防止RNA降解 。 DNA应置于-20℃保存， RNA和需长期保存的DNA应置于-80℃保存 。
2、逆转录合成cDNA 。 逆转录cDNA合成反应需使用逆转录引物、dNTPs、逆转录酶、RNA酶抑制剂、DTT、缓冲液和适量无RNA/DNA酶的超纯水以及RNA模板 。 在扩增仪或水浴箱中， 在规定的温度和时间下进行逆转录反应 。
3、PCR扩增反应PCR反应需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶、缓冲液、和适量无RNA/DNA酶超纯水、以及模板 。 在扩增仪中， 按照设定的程序进行扩增 。 使用二次扩增的套式PCR扩增方法 。
4、扩增产物定性分析；扩增产物常用分析方法是琼脂糖凝胶电泳法， 与分子量标准比较， 判断扩增片段是否在预期的分子量范围内 。 其它扩增产物分析方法还有限制性内切酶酶切分析、特异性探针杂交分析以及DNA序列分析等 。
5、结果判定和完成报告单：每一次检测需同时做两个阳性对照、两个阴性对照， 只有阳性对照扩增出预期的片段、阴性对照没有扩增出任何片段、双份平行样品结果一致的情况下实验才成立， 可以作出核酸阳性或阴性反应结果的判定 。
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