铁皮石斛的茎段快繁铁皮石斛DendrobiumofficinaleKimuraetMigo是兰科石斛属多年生附生草本植物, 因其茎节处呈黑褐色, 又名黑节草, 具有益胃生津、滋阴清热、清咽利嗓, 提高人体免疫能力、抗肿瘤、抗衰老等功效, 主要分布于云南广南、邱北、马关、文山及怒江与恩梅开江的分水岭一带, 海拔1600米以下, 以及江南各省 。 多附生在亚热带人迹罕至的深山密林阴湿悬崖峭壁处、树上或长青苔的岩石上 。 铁皮石斛的种子极小、无胚乳, 自然条件下需与某些真菌共生才能萌发, 很难用实生苗栽培;而传统的分株、扦插等方式的繁殖率极低, 加上人为的过度采挖和破坏生态环境, 其资源已濒临灭绝, 因而被国家列为重点保护的药用植物之一, 铁皮石斛组织培养快速繁殖被国内外学者广泛关注 。 铁皮石斛的茎段快繁直接取材于幼嫩茎段, 具有取材易、速度快、污染率低、繁殖系数高等优点, 可在短期内为生产提供大量栽培用苗, 因而能有效保护这一宝贵资源 。
1.外植体的消毒
石斛茎段在无菌操作台上用75%的酒精进行表面消毒, 去掉灰尘, 再用0.1%的升汞灭菌5~8分钟, 用无菌水冲洗3次, 在此过程中应不断摇晃烧杯, 使其充分灭菌 。
2.试验过程
将已经灭菌的石斛茎段, 在无菌条件下切成至少带有一个茎节的茎段, 接种于诱导培养基中诱导出芽, 将芽再诱导出原球茎, 原球茎再分化, 再壮苗, 便可将生长健壮的植株移栽 。
3.培养基
基本培养基为N6, 附加0.75%琼脂, 3%白糖, PH值为5.8, 培养基进行常规高温高压灭菌, 温度为121℃, 1.1Mpa, 15分钟即可 。 激素添加如下①诱导茎节发芽:N6+BA2.5毫克/升;②诱导芽形成原球茎:N6+BA2.5毫克/升+I-BA0.5毫克/升;③诱导原球茎分化为植株:N6+BA1.5毫克/升+NAA1.2毫克/升+香蕉汁5%;④生根壮苗培养:N6+NAA2.5毫克/升+土豆汁10% 。
或基本培养基为MS, 附加0.75%琼脂, 3%白糖, pH5.8 。 (1)芽增殖培养基:MS+NAA0.1~0.5毫克/升+BA0.5~2.0毫克/升;(2)壮苗培养基:MS无激素培养基;(3)生根培养基:1/2MS+IBA0.1毫克/升 。
4.培养条件:
温度控制在25±1℃, 日光灯照射, 每天12小时 。
5.移栽
移栽时先将已经长大的石斛种苗取出, 用清水洗去根部的培养基, 洗净为止, 动作要轻, 避免损伤其根和叶 。 然后栽种在以矿质岩:泥炭土为1∶1的基质中 。 放在遮荫棚里练苗一周, 便可正常管理, 保持湿度80%, 温度不可超过35℃, 不接受长时间的阳光直射 。
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