质粒转化没有菌落原因 感受态细胞转化注意事项
感受态细胞的制备时有什么注意事项？1、将培养液转入离心管中，冰上放置10分钟，然后于4℃下3000g离心10分钟 。
【质粒转化没有菌落原因 感受态细胞转化注意事项】2、弃去上清，用预冷的0.05mol/l的cacl2溶液10ml轻轻悬浮细胞，冰上放置15-30分钟后，4℃下3000g离心10分钟 。
3、弃去上清，加入4ml预冷含15%甘油的0.05mol/l的cacl2溶液，轻轻悬浮细胞，冰上放置几分钟，即成感受态细胞悬液 。
4、感受态细胞分装成200μl的小份，贮存于-70℃可保存半年 。
什么叫感受态细胞?什么叫转化？不对，通过转化到感受态细菌中，不是细胞.感受态的大肠杆菌，可以自己制作也可以通过购买.之后将细菌凃到含有抗生素的板子上，长出克隆后挑取单克隆，将单克隆加入含有抗生素的细菌培养基中培养，之后提取质粒，提取质粒可以购买相应的试剂盒，按照试剂盒的说明书操作即可.质粒是带有抗性基因的，只有含有该质粒的细菌才能在含有对应抗生素的培养基中存活并增殖，这样就能确保是你的表达载体质粒.当然为了防止杂菌的污染，整个过程中最好是无菌操作.而表达载体质粒有可能出现突变等情况，所以可以在提出质粒之后，取少量质粒送测序，来确保序列的无误.
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