如何制作玻片标本,制作玻片标本七步口诀( 六 )
涂片时应注意:(1)载玻片必须清洁 。 (2)载玻片要持平 。 (3)涂层须均匀 。 涂抹液滴在载玻片中间偏右, 用解剖刀刃或牙签等涂匀 。 (4)涂层要薄 。 用另一载玻片作推片, 沿滴有涂抹液的载玻片面(二载玻片夹角应为30°~45°)由右向左轻轻推动, 涂成均匀一薄层 。 (5)固定 。 如需固定可用化学固定剂或干燥法(细菌)固定 。 (6)染色 。 细菌用亚甲基蓝, 血液用瑞氏染液 。 染色液要盖住全部涂面 。 (7)冲洗 。 用吸水纸吸干或烤干 。 (8)封片 。 长期保存用加拿大的树胶片片 。
2.压片法
压片法是将生物材料置于载玻片和盖片之间, 施加一定压力, 将组织细胞压散的一种制片方法 。
压片法的一般过程:(1)取材 。 观察细胞分裂, 应选取细胞分裂旺盛、新鲜的组织细胞为材料 。 如根尖、茎尖分生组织、骨髓细胞、花药(花粉母细胞) 。 精巢(精母细胞)等 。 (2)固定 。 材料固定可根据需要而定, 取材后立即压片观察, 可不作单独固定处理(与染色同步进行);取材后不立即视察, 可将材料用固定液(一般用醋酸酒精固定液)固定 。 固定2~24小时(因材料而异)后用95%乙醇清洗, 保存于70%乙醇中, 备用 。 (3)离析 。 对细胞不易散开材料用水解分离液(如1N
HCl或盐酸一酒精液)处理, 一般处理6~20min, 解离后经水漂洗后方能染色 。 (4)染色 。 染色剂种类很多 。 观察染色体常用醋酸洋红染色液染色 。 (5)压片 。 将材料放在载玻片上, 加一滴清水或染液, 盖上盖玻片用拇指轻轻压片 。 (6)观察 。 压片后, 即可在显微镜下观察 。
3.装片法
装片法是将生物材料采取整体封固制成玻片标本的方法, 用此法可制成临时或永久装片 。
装片材料有:微小生物如衣藻、水绵、变形虫、水螅, 植物的叶表皮;昆虫的翅、足、口器, 人的口腔上皮细胞等 。
装片法制作时应注意:(1)手持载玻片时, 应注意持平, 或放在平台上 。 滴水时水量要适当, 以恰好被盖玻片盖满为度 。 (2)应将材料用解剖针或镊子展开不使重叠, 展平在同一平面上 。 (3)放盖玻片时, 从一侧慢慢盖在水滴上, 防止出现气泡 。 (4)染色时, 将一滴染色液滴在盖玻片的一侧, 用吸水纸从另一侧吸引, 使盖玻片下的标本均匀着色 。 着色后, 用同样的方法, 滴一滴清水, 把染色液吸出后, 在显微镜下观察 。
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