旱半夏组织培养条件的优化研究半夏pinellia tenata(thunb.)breit为天南星科多年生草本植物，以块茎入药，是一种重要的中药材 。 其性温，味辛，有小毒，归脾、胃、肺，经炮制后具有润燥化痰、降逆止呕、消痞散结之功效［1］ 。
旱半夏多为野生，尽管具有明显的杂草性，但其繁殖系数较低，又缺乏有效的传播方式，因而是一种开拓性差的物种［2］ 。 近年来随着连年采挖，野生资源日趋枯竭，远不能满足市场需求 。 人工栽培时，采用大块茎出售，珠芽、小块茎育苗，用种量大，成本高 。 小块茎无性繁殖易使半夏产量降低，品质退化，使半夏的栽培生产受到限制 。 利用组织培养建立半夏无性快速繁殖系统，可提高其繁殖系数，同时可防止品种退化问题 。
本研究主要是对半夏组织培养条件进行优化，为大规模进行工厂化生产提供技术支持，前人研究中培养基使用琼脂固化，本研究尝试使用卡拉胶代替琼脂固化，取得了良好的效果，卡拉胶较琼脂价格低很多，因此可以为大规模进行工厂化生产节约成本 。
1 材料与方法
1.1 材料旱半夏小块茎， 购于安国市北方药材种子经销站 。
1.2 消毒方法
取健康的旱半夏小块茎，用清水洗净，放于超净工作台中灭过菌的空三角瓶中，先用含有吐温的0.1%的升汞溶液消毒10～12 min，再用75%的酒精消毒30～60 s，最后再用无菌水冲洗5～6次，备用 。
1.3 培养基及试验
设计设计以ms、1/2ms为基本培养基，基于我们的研究目的旨在指导并应用于大生产，所以为尽量节约成本和适应大规模生产所需，本试验选择了细胞分裂素中效果较好且最为廉价常用的6-ba、生长素选择了naa，以期筛选出适合于半夏生产的最佳培养基 。
发芽培养基：ms 。
继代增殖培养基：在ms培养基中分别附加ba0.5，1.0，2.0，3.0 mg/l；naa0.05，0.1，0.2，0.5 mg/l；采用二因素完全随机设计（见表1）进行最适激素配比的筛选，共计16个处理组合（见表2），每个处理接4株无菌苗，重复3次 。 表1 激素配比二因素完全随机设计因素水平（略）
生根培养基：在1/2ms培养基中分别附加0，0.01，0.05，0.10 mg/l naa 。
1.4 培养条件
所有培养基皆以浓度为0.7%的卡拉胶固化，含蔗糖均为3%，在高压灭菌前将ph值调至5.8，温度为（25±2）℃ 。 光照1 500～2 000 lx，每日光照时数12～14 h 。
结果
2.1 无菌苗的获得
将小块茎接种到ms培养基中进行发芽培养，培养4～7 d内进行观察统计发芽情况 。 观察统计发现，当培养7 d时，小块茎的发芽率达到了100%，继续培养无菌苗长势良好 。
2.2 继代增殖培养
将小块茎发芽得到的无菌苗接种到表2处理组合的培养基中，培养1周左右无菌苗上端死亡，而在基部开始膨大，培养2周时形成愈伤组织（见图1），培养3周时愈伤组织分化成苗（见图2），培养4周时对其进行观察和相关数据统计 。
从表2可见，1～6号培养基中组培苗没有增殖，而7～16号培养基均有一定程度的分化增殖，但是差别相对较大 。 从分化出的苗的高度以及增殖系数来看11号培养基最佳，增殖系数达到6.5，平均苗高达2.5 cm 。 其他培养基的增殖系数分布在1.2～4.0之间，平均芽苗高分布在1.2～2.0之间 。 从而筛选出最适继代增殖培养基为： ms+6-ba2.0 mg/l+naa0.5 mg/l 。 继代分化增殖情况见图3 。 表2 植物激素配比对旱半夏继代增殖培养的影响（略）
2.3 生根培养
选择继代培养后生长健壮并且有一定高度的试管苗，将其分成单株，分别接种到生根培养基上培养，10 d后观察并统计结果 。 见表3 。 表3 不同生长素浓度对旱半夏生根的影响（）
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