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【花卉大全】无菌接种

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无菌接种【【花卉大全】无菌接种】（一）实践目的

组织培养是一个技操作性很强的技术 ， 需要多看多做 ， 通过实践 ， 掌握植物外植体表面消毒技术 ， 茎尖切割技术及培养技术 。

（二）实践用具与材料

超净工作台、18cm手术弯剪、16cm镊子、接种盘、毛刷、纱布、培养瓶 。 带嫩芽的枝条若干、培养基250瓶、洗衣粉1袋、2%新洁尔灭500ml、75%酒精4l、0.1%升汞1l 。

（三）实践学时与场地

8学时 ， 植物组培实验室

（四）实践内容

1、外植体的选取及预处理

⑴外植体选取

选取生长健壮、已发芽、长势较好、无病害的植物带芽的枝条作为外植体 。

⑵材料预处理

取带芽的枝条 ， 用洗衣粉适量冲洗 ， 然后扳取或用清洁剪刀剪取带芽部位（约1cm×1cm大小） ， 顶芽和腋芽、大芽和小芽分开 。 继续用洗衣粉清洗10分钟 ， 清洗时需不停晃动 。 再用自来水冲洗干净 ， 置空培养瓶备用 。

2、外植体消毒

⑴蒸馏水冲洗

外植体置于已杀菌开机的超净工作台上 ， 新洁尔灭洗液消毒双手 ， 用无菌蒸馏水清洗外植体2-3次 ， 需晃动 。

⑵酒精消毒

75%酒精倒入装外植体的容器内 ， 消毒外植体30-60s ， 时间长短视植物材料情况而定 。 动作一定迅速 ， 需晃动 。 然后将酒精倒去 。

⑶升汞消毒

1%生汞倒入装外植体的容器内 ， 消毒外植体5-10min ， 时间长短视情况而定 。 需晃动 ， 在最后3min静置 ， 升汞注满容器 ， 将已灼烧的镊子放入容器升汞内浸泡 。

⑷蒸馏水清洗

用镊子将外植体取出 ， 放入另一无菌蒸馏水瓶中清洗 ， 反复清洗4次 。

⑸茎尖的剥离

用灼烧冷却的镊子和剪刀对外植体进行处理 ， 剥离外植体材料芽外部小叶片 ， 露出尖端生长点和2-3片叶原基部分 ， 将此部分剪下做培养材料 。 再用无菌蒸馏水清洗3-4次 。

⑹接入培养基

培养基瓶放入工作台内 ， 将剥离的材料分别用消毒过的镊子放入培养瓶内 ， 盖上瓶盖 ， 置培养篮内 ， 写上培养时间、操作人及培养品名 ， 入培养室培养 。

（五）作业

写出实践报告 ， 简述无菌接种操作程序与体会 。

（六）评分标准

明确茎尖培养程序 ， 无菌接种操作熟练无菌 ， 酒精、升汞处理时间得当 ， 接种成功率﹥50% 。

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