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【花卉大全】无菌转接

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无菌转接（一）实验目的

通过超净工作台上的转接操作反复训练， 强化的无菌转接操作技能 。

（二）实验用具与材料

超净工作台、70%酒精、酒精灯、已灭菌的18cm-20cm手术弯剪、2%新捷尔灭溶液、纱布、广口瓶、记号笔、装培养瓶的篮框、污染玻璃瓶、试管刷 。 试管苗、盛有培养基的培养瓶 。

（三）实验学时与场地

8学时， 植物组培实验室

（四）实验内容

1、准备工作：

⑴在准备室肥皂洗手， 换上工作服、拖鞋等 。

⑵开启工作台紫外灯和房间紫外灯， 10分钟后打开超净工作台的风机， 开启紫外灯15分钟后关闭， 风机不关 。

⑶再清洁

用2%新捷尔灭擦拭双手和超净工作台台面 。

2、转接操作：

⑴放置培养瓶、器械

将试管苗及培养瓶用2%新捷尔灭擦拭干净， 放入超净工作台内， 分作两边放置 。 剪刀取出后放入酒精瓶中， 切忌扔在台面， 使用时需用火焰灭菌5分钟 。

接种器械是影响转接成功的关键因素， 一定要剪刀前端、中部、正面、背面均烧到位， 保证无菌 。

⑵转接

左手握住新培养瓶， 打开瓶盖， 灼烧瓶口， 同时将接种器械放入培养瓶内壁冷却 。 转接一瓶试管苗， 每次剪取带1-2片芽和叶的茎段插入培养基中， 一瓶转接入三瓶新培养基中， 每瓶内试管苗均匀放置， 长度一致（1-2cm） 。

转接中防止污染， 随时带着有菌观念， 进行无菌操作， 器械不能碰触超净工作台及培养瓶外侧， 更不能伸出工作台外面 。

3、整理清洁

转接完后， 用特种笔在每瓶培养基上记录：转接的试管苗品种符号、日期、转接人， 以备以后观察 。

清洁台面、器械、以及无菌接种室 。

4、注意事项

⑴清洁台面时， 酒精不能擦拭工作台四周侧面， 只能用2%新捷尔灭擦拭 。

⑵接种器械必须灼烧到位， 防止带菌， 培养瓶口也需灼烧 。

⑶转接时， 手不能解除培养瓶口及试管苗， 也不能接触接种器械中上部要伸进培养瓶的部位 。

⑷培养瓶盖必须立放， 器械不能掉落在台面上， 或碰触工作台周边， 如有立即换器械 。

⑸操作要迅速， 如培养瓶和试管苗暴露过久， 污染机会增多 。

⑹转接中还应注意试管苗状态， 如是真菌污染苗， 不能转接， 细菌苗不是很严重的， 视情况可转接上部 。

⑺清洗器械时， 注意用钢丝刷清洗掉容易藏污的地方， 母瓶不用要将培养基倒出， 将瓶洗净， 纱布也要洗净 。

（五）作业

写出实训报告， 分析实践结果及体会 。

（六）评分标准

无菌转接程序正确， 操作熟练迅速， 培养瓶内分布均匀， 茎段高度一致， 污染率低于5% 。
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