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2、接种方法
①活蚕体接种 。 北虫草菌种不是家蚕的致病菌种, 而且家蚕肠道消化液呈强碱性, 虫草菌孢子不易存活 。 因此, 采用单纯的食下或体喷均不能使家蚕有效感染, 只有用昆虫针穿刺接种和注射接种才能使家蚕感染菌种, 温鲁认为其中以穿刺接种效果最好 。 但我们的试验结果则是注射接种效果要明显优于其他方法 。 还有一种活蚕体接种方法, 是将消毒的蚕体撒在固体菌种上, 再用菌种盖住虫体空间, 然后用消毒的塑料薄膜盖住, 四周压严实, 10d左右虫草菌丝可感染蚕体 。
②以家蚕做培养基接种 。 这种方法是要将5龄蚕经过高温蒸汽灭菌后晾干, 再加入一定量的营养成分, 在无菌条件下用组织块法, 将培养的菌接种于家蚕的体表, 然后在无菌条件下进行培养, 也可以致使家蚕感染 。 这种方法实际上相当于以家蚕做培养基, 提供虫草菌所需的动物性营养源 。
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3、接种时间
以家蚕做培养基的是选用5龄蚕, 这时期蚕体比较大, 营养比较充足 。 用固体菌种感染家蚕的是选用3龄蚕或5龄蚕 。 至于穿刺感染家蚕的最佳时间, 则有不同的观点, 有人认为5龄6d感染率最高, 也有人认为5龄起蚕和5龄6d蚕接种都比较好 。 因为5龄起蚕后家蚕不再休眠, 且有8~9d龄期, 正好与病程相吻合, 是接种最佳蚕龄;5龄6d接种虽然成功率最高, 但2~3d后即吐丝结茧, 不能有效利用丝腺蛋白, 营养成分和虫草重量受到影响 。 总之, 1~4龄的蚕体较小, 对接种于其体内的虫草菌可提供的营养有限, 而且各龄的龄期较短, 感染的家蚕在眠期内不能正常蜕皮, 容易感染其他病原菌 。 而5龄后期的蚕在感染致死前能够正常结茧, 这样不仅其体内的丝腺蛋白没有被虫草菌利用, 而且给生产带来不便 。 只有5龄前期的蚕体大、龄期长, 比较适宜接种 。
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4、消毒方法
家蚕接种虫草菌前的消毒方法有紫外线消毒和消毒剂消毒等 。
5、感染后的症状
家蚕感染北虫草后, 初期无明显症状, 幼虫感染致死后的初期蚕体柔软、具有弹性、头胸伸出、体表有针尖状褐色小病斑, 2~3d后虫体逐渐硬化, 体表节间膜、气门处长出白色的气生菌丝, 气生菌丝上着生圆形的分生孢子 。
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